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通道载玻片--IL-33免疫荧光染色实验
发布时间:2016-06-20   点击次数:1415次

细胞的免疫荧光实验是一个基础的细胞实验,传统的方法是在培养板中放入预先处理好的盖玻片,待细胞贴壁后,使用镊子将盖玻片拿出再开始进行固定,染色等系列工作。为了简化这一工作,一系列底部适合直接成像的细胞耗材应运而生,如图:

日本的科研人员在研究细胞因子IL-33在Ca9-22细胞中免疫荧光染色试验时使用了一种通道载玻片。IL-33是一种在内皮细胞中常规表达的细胞因子,其参与调节了先天免疫细胞的Th2 细胞因子介导的免疫应答。研究人员想研究增强IL-33表达的牙周内皮细胞中牙周菌Porphyromonas gingivalis所发挥的作用。研究人员使用牙周菌P。gingivalis刺激Ca9-22细胞,再测试其中IL-33的表达。

 

Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells

H。 Tada, T。 Matsuyama, T。 Nishioka, M。 Hagiwara, Y。 Kiyoura, H。 Shimauchi and K。 Matsushita

PloS one, 2016, 10.1371/journal.pone.0152794

 

一)实验材料:

1)Ca9-22细胞

2)牙周菌P.gingivalis      50 μg/ml

3)多聚甲醛溶液            4%

4)BSA                    1%PBST溶液

5)藻红蛋白偶联的大鼠抗人IL-33抗体  (clone, 390412; R&D Systems)

6)DAPI

8)六通道载玻片          ibiTreat,德国ibidi公司,80606

图一:通道载玻片示意图。细胞的免疫荧光实验简化,并且节约试剂(单通道30μl),细胞分布及其均匀,成效效果好。

 

二)实验步骤

1)单通道铺入3×105 Ca9-22细胞,37℃,5%CO2环境中孵育过第二天待细胞贴壁。

2)使用无细胞培养基,轻轻冲洗通道,移除未贴壁细胞(图二)。

 

图二:冲洗换液方法,蓝色代表新的无细胞培养基

3)用50 μg/ml牙周菌P。gingivalis,(MOI为0.13)加入通道中,刺激Ca9-22细胞4天

4)用4%的多聚甲醛固定15分钟

5)用1%BSA的PBST溶液封闭30分钟

6)使用0.5μg/ml的藻红蛋白偶联的大鼠抗人IL-33抗体4℃孵育1小时

7)DAPI孵育1分钟

8)用荧光显微镜观测数据。

 

  • 实验结果

 

 

图三:牙周菌P.gingivalis增强牙周内皮细胞中IL-33的表达。用50 μg/ml牙周菌P.gingivalis,刺激Ca9-22细胞后使IL-33(红色)表达有显著的提高。细胞核(蓝色)

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